hanks液 第一篇_hanks液
甲液：Na2HPO4 2H2O 0．06克 KH2PO4 0．06克 MgSO4 7H2O 0．20克葡萄糖 1．00克 NaCl 8．00克三蒸水 750毫升
乙液：CaCl2 0．14克三蒸水 100毫升
①将乙液徐徐加入甲液中。②将0．35克NaHCO3溶解在37℃ 100毫升三蒸水中。③用数滴NaHCO3液溶解0．02克酚红。④将②、③液移入①液中。⑤用三蒸水定容至1000毫升，充分混匀，4℃冰箱过夜。⑥滤过消毒，小瓶分装，冷藏。
注意：酚红对细胞有一定毒性，目前实验中的用量除0．02克外，还有0．01克和0．005克，也有BSS液中不加酚红的。酚红量不同，BSS颜色也不同
A液NaCI 80．0g，KCI 4log，CaCI 1．4g，MgS04。7H20 2．Og，加蒸馏水至450mi。
B液 Na2HP04·12H20 1．52g，KH 2P04 0．60g，C8Ht 20。10．Og，加蒸馏水至450mi。
C液 1％酚红16mi，酚红1 g置研钵中，加少量l mol／LNaOH研磨至糊状，加水至100ml，过滤后使用。
【配法】
(1)将B液慢慢倒入A液，不断搅拌后再加入C液。(2)船蒸馏水至1 000ml。 {生殖就医指南网 .是你知心的朋友}(3)113~20分钟高压灭菌后，4℃贮存。
Hanks应用液
母液作lO倍稀释后，高压灭菌，一4℃贮存备用。
Hanks营养液
于应用液中按比例加入0．5％水解乳蛋白，灭菌，4℃贮存。
hanks液 第二篇_Hanks、D-Hanks液配制,胰酶液的配制
Hanks、D-Hanks液配制，胰酶液的配制
2009年02月06日 星期五 10:36
Hanks液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hanks液则是无钙镁离子的Hanks液。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在BSS中可生存几个小时。 胰蛋白酶(胰酸)溶液是一种常用的细胞消化液，原代培养时用于处理组织块，使细胞分离下来。传代时用胰蛋白酶使培养细胞离开所贴附的培养瓶表面，并分散成单个细胞。胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏，呈白色粉末状，易潮解，应在低温干燥处保存。胰酶的活力常用一份胰酶解离酪蛋白的份数表示，常用胰酶活力为1：125或1：250。本实验室一般用1：250(GRC公司生产)。胰蛋白酶对细胞的分离效果与细胞的类型、特性和瓶壁表面特性有关。一般来说浓度大、温度高(勿高于37℃)、作用时间长，则对细胞分离能力大。但超过一定程度会损伤细胞，导致细胞传代后不能贴壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃时消化能力最强。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清会降低胰酶活力，所以配制胰酶时须用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。当消化结束时，可加入少量血清或含血清的培养基以终止胰酶作用。 细胞传代使用的胰酶浓度是0．25％或0．2％。用于原代细胞培养消化组织块则为0．1％或0．125％。
***材料：3 000 mL锥形瓶，25 mL、50 mL试剂瓶，500 mL输液瓶，螺口盖，翻帽塞，pH试纸，孔径0．22μm的微孔滤膜。
***药品：NaCl，Na2HP04，KH2P04，KCl，酚红，NaHC03，胰蛋白酶干粉，0．02％EDTA，CaCl2，D-葡萄糖，MgCh·6H20，MgS04·7H20，酚红(0．1％)(配法：称酚红2 g，置于研磨器中，先用数滴5．6％的NaHCO3溶液溶解并研磨，再加进该5．6％NaHC03溶液使最终体积为100 mL。瓶装保存，备用)。
***仪器(请参看仪器图库)： 抽滤泵1套，过滤器1套，高压灭菌锅，量筒，磁力搅拌器，研磨器。
(一)配制D-Hanks液
1．按表2—3—5称取D-Hanks试剂。
2．依次加入上述试剂至800 mL蒸馏水中，溶解后定容至1 1000 mL。 3．高压灭菌，10磅10 min。
(二)配制Hanks液
1．按表2—3—5称取Hanks试剂。
2．配制Hanks时，需将CaCl2另溶解于100 mL的蒸馏水中。
3．依次加入上述试剂至700 mL蒸溜水中，溶解后再与CaCl2溶液一起定容至1 000 mL。
4．10磅，10 min高压灭菌。
(三)配制胰蛋白酶消化液
1．D．Hanks液高压灭菌之后，晾至室温，4℃保存备用。
2．称取一定量胰蛋白酶粉末于研磨器中(夏天时研磨器应放在冰浴中)，加入少量D－Hanks液研磨1 000次左右，调制成糊状。再放入4℃预冷的适量D-Hanks液中，4℃下磁力搅拌使完全溶解。
3．用NaHC03干粉将胰酶溶液的pH值调至8.0左右(胰酶作用的最适pH值)，并加入0.02％EDTA以协助消化作用。
4．滤过除菌,－20℃冻存。
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对一般细胞 0.25% 胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)
配方：100ml PBS,0.25g胰酶
步骤：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O
/2.9gPO4HNa2 ,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸馏水)
2 称胰酶0.25g
3 加入PBS中，低速搅拌 〈4h冰浴中,或者4℃过夜
低速搅拌0.5h冰浴中
4 调PH7.4
5 仍在冰浴中
6 过滤，分装，-20℃保存，4℃短期内用完
tip:低速很重要，机械搅拌对酶是一种冲击，如果起沫，
酶就变性了。低温，防止酶失活
对难消化的细胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)
tip:因为EDTA可以络合Ca2+，增加消化效力
hanks液 第三篇_Hanks液配方
Hanks 500ml PH：7.35-7.45
Name WM（g/ml） 应称（g）浓度（mmol/l） 批号
NaCl 58.44 4.0000 136.9 S5886-500G KCl 74.55 0.2013 5.4 S3911-500G CaCl2 147.02 0.0955 1.3 C5080-500G MgSO4 120.37 0.0481 0.8 M2643-500G KH2PO4 136.09 0.0299 0.44 P5655-100G Na2HPO4 141.96 0.0241 0.34 S5136-500G D-glucose 180.16 0.4999 5.55 G7021-100G NaHCO3 84.01 0.1764 4.2 S5761-500G
hanks液 第四篇_hanks液的配制细胞培养技术
Hanks液的配制：① NaCl 8克、KCl 0.4克、MgSO47H2O 0.1克、MgCl·6H2O 0.1克溶于800毫升重蒸馏水中；② CaCl2(无水)0.14克溶于100毫升重蒸馏水中；③ 葡萄糖1.0毫克、NaHPO4 0.154克、KH2PO4 0.06克、0.4%酚红液 5毫升溶于100毫升重蒸馏水中。将上述3种溶液混和，8磅30分钟灭活菌，或用玻璃滤器过滤。保存在5℃备用，用前以5%NaCO3调pH。
细胞培养技术（一）
一.细胞培养的基本原理
细胞培养是用酶消化法将组织碎块分离成单个细胞，用培养基制成细胞悬液，在体外适宜条件下，
使细胞生长繁殖，并保留其一定的结构和功能特性。细胞培养与组织培养、器官培养主要不同点在于原始培养的对象不同。细胞培养使用的是单个细胞悬液，组织培养使用的是组织块(0．5～1立方毫米)或薄片(厚0．2毫米)，而器官培养使用的是器官原基或器官的一部分或整个器官。在组织培养中，细胞自组织块周围移出并生长，细胞在生长过程中总有移动(运动)或其它变动，这样就使被培养的组织难以长期维持其原有的结构和功能。培养时间越长，发生变化的可能性越大，结果常使单一类型的细胞保存下来，最终成了细胞培养。在细胞培养中，细胞生命活动和体内细胞一样，仍然是相互依存的，呈现一定的组织特异性，所以组织培养和细胞培养实际上无严格区别。
细胞培养技术是生命科学中常用的研究手段，该方法能排除神经体液因素的影响及肝、肾解毒功能的干扰，观察某些因素或药物对培养细胞的直接作用。通过实验可获得某一类型细胞的纯培养。如心肌组织中心肌细胞约占50％，非心肌细胞占50％；而经纯化分离的心肌细胞悬液中，心肌细胞可达95％以上，这样，心肌细胞原代培养实验基本不受其它细胞的干扰。在细胞培养实验中能直接观察到培养细胞生命活动的动态过程；用定时显微摄影记录可发现一些肉眼观察不到的生命现象；还可利用电镜手段、同位素标记、放免法和免疫组化法等来研究细胞形态结构及细胞内化学物质的分布。此外，还能节约研究费用。如在某些研究中，用100只动物做实验所获得结论与用100张盖玻片或几十个培养瓶而获得结论具有相同的统计学意义，而细胞培养较之大批量的动物饲养花费要小。
但细胞培养方法也存在不足之处：培养细胞失去体内细胞的制约和整体的调节作用，细胞形态和功能会发生一定程度的改变。培养方法、实验试剂对细胞形态和功能有一定的影响，如胰蛋白酶可破坏细胞表面受体、酶、抗原等。长期体外培养的细胞，由于反复传代、冻存和操作等因素的影响，可能发生染色体非整倍体改变，呈永生化或癌变的特征。
二.细胞培养的基本设备与用品
(1) 细胞培养的基本设备
细胞培养的基本设备有：CO2培养箱，倒置显微镜，净化台，压力蒸汽消毒器，自动双重纯水蒸
馏器，液氮罐，冰箱，电热干燥箱，电热恒温培养箱，电动吸引器，抽气泵等。
1. 玻璃器皿
细胞培养所用的玻璃器皿应由透明度好、无毒的中性硬质玻璃制成。常用的有以下几种：国产螺旋口培养瓶[有12．5毫升，25毫升，100毫升等规格，国外培养瓶常以底面积(平方厘米)表示]；培养皿(直径有3．5厘米，6厘米，9厘米，10厘米等规格)；离心管(5毫升，10毫升)；注射器(1毫升，5毫升等)；用生理盐水瓶代替的贮存瓶(100毫升，250毫升，500 毫升)；青霉素瓶(5毫升)；西力辛瓶(10毫升)；其它还有尖吸管和移液管，载玻片(厚度0．8～1．2毫米)，盖玻片(厚度0．12毫米)，贮存尖吸筒用的玻璃筒或金属筒，漏斗，烧杯，量筒，贮蒸馏水瓶，冷冻管(1．5毫升，2毫升)等。 2. 塑料品
多孔培养板规格有4、6、12、24、96孔等，培养皿直径有3厘米、6厘米、10厘米等。塑料品经消毒灭菌密封包装，供一次性使用，重复使用的需经特殊方法清洗消毒。塑料器材厚薄均匀，有的表面经特殊处理，细胞易于生长。 3. 器械
解剖刀、眼科剪和镊(直头和弯头)、中号圆头镊、止血钳等。 4. 杂用品
金属饭盒、试管架、各种规格胶塞、记号笔、搪瓷盘、吸头(吸取液体的胶帽)、酒精灯、酒精、碘酒棉球瓶、火柴等。
组织培养中使用最多的是吸管、培养瓶、培养皿及各种瓶塞。实验者手中应有三套器材，瓶塞数要大于瓶数，才能保证实验中的循环使用。
(2) 常用的实验用品
三.细胞培养用品的清洗与消毒灭菌 (1) 清 洗
1. 常用玻璃器皿清洗 ◇ 清洗要领【hanks液,】
浸泡
初次使用的玻璃器皿呈碱性，表面常附有灰尘和一些对细胞有毒的物质，如铝和砷等。空气湿度
高时，玻璃器皿表面又易长霉。使用前，新器皿浸泡在5％稀盐酸中过夜，以中和玻璃表面的碱性物质并去除霉斑；然后经简单刷洗，流水冲洗(逐片进行)，蒸馏水浸泡，干燥备用。新玻片处理后，短时间不用时，需将它投入95％的酒精中保存，以防玻片长霉。培养后的玻璃器皿应立即投入清水中浸泡，器皿中残留的细胞、蛋白质一旦干涸，即固着于玻璃表面，极难脱落。
刷洗
用过的玻璃器材经自来水冲洗后，浸入水中煮沸，然后将适量洗涤剂(洗洁精或洗衣粉)投入沸水中继续煮沸10分钟，趁热刷洗器皿内外，刷洗后浸入清水中进行冲洗。 酸泡
刷洗好的玻璃器材干燥后置清洁液中浸泡24小时，清洁液的强氧化作用可清除刷洗不掉的极微量杂质。 ◇ 清洗步骤
玻璃器材煮沸10分钟→刷洗→流水振荡冲洗15-20遍→50℃烤干→清洁液浸泡24小时→流水振荡后冲洗15-20遍→漓水→蒸馏水浸泡2次(每次24小时)→50℃烤干，待包装。 ◇ 清洗注意事项和要求
① 使用后的实验器材应立即投入清水中。
② 浸泡、煮沸、酸泡的器皿内要充满液体，不得有气泡。
③ 刷洗、酸泡后的器材要用流水振荡冲洗，不得残留洗涤剂、清洁液。方法是：每瓶灌2／3容积
的自来水，振荡后倒掉，重复15—20次(尖滴管置量杯中冲洗)。
④ 煮沸前的水面要高于器材5厘米，水沸后投入洗涤剂(直径35厘米的铝锅，用洗衣粉10克左右)。 若洗涤剂和实验器材同时从冷水煮至沸腾或使用过量洗剂，均易腐蚀玻璃表面，使玻璃碱化， pH值上升。
⑤ 软毛刷的刷端已掉毛的应该弃去，否则会损害玻璃。玻璃划痕处易残留洗涤剂，会改变培养液 pH值和毒害细胞。
⑥ 清洁物品应及时包装消毒，应注意妥善保存，防止落入灰尘、蟑螂、蚂蚁等引起二次污染。 ⑦ 使用后的胶塞与玻璃器材同时煮洗时，胶塞要放在煮锅的底部。
⑧ 浸泡器材的蒸馏水容器要专用，并做好标记，如“蒸馏水Ⅰ盆”、“蒸馏水Ⅱ盆”。
⑨ 器材清洗干燥后，在以后各步操作时，手指不可接触器材的使用端。清洗者可戴一次性薄膜手
套进行操作，省时又保证清洗质量。 ⑩ 用超声波仪清洗器材时，清洗要求同上。
2. 橡胶制品的清洗
新购置的橡胶制品(胶塞、胶管、橡皮乳头)的洗涤方法如下：0．5摩尔/升NaOH煮沸15分钟→流水冲洗→0．5摩尔/升HCl煮沸15分钟→流水冲洗→自来水煮沸2次→蒸馏水煮沸20分钟→50℃烤干备用。这样处理可完全除净胶塞上的硫磺等有毒物质。用过的胶塞，其清洗方法、要求基本同玻璃器材。因胶塞使用面常沾有洗涤剂，流水冲不净，故胶塞洗刷的重点部位是胶塞使用面，用刷逐个刷洗。在使用过程中，胶塞不能与培养液接触，以防未洗净的胶塞污染培养液和细胞。
新G6除菌滤器置玻璃洗液中浸泡24小时，流水缓慢冲洗，至pH值为5．5左右，然后用4倍的蒸馏水缓慢冲洗，再用重蒸馏水缓慢冲洗，烤干，包装消毒备用。用过的G6除菌漏斗立即浸泡水中(注意：滤器千万不能干涸)过夜，流水缓慢冲洗24小时或更长时间，至滤面基本疏通时，50℃烤干，滤器再置清洁液中浸泡24小时，或装满清洁液自然过滤。流水冲洗及其后的处理同
3． G6除菌滤器的清洗
新G6除菌滤器。
4. 正压除菌滤器的清洗
新的或使用后的正压滤器经稀洗涤剂刷洗一流水冲洗15分钟→漓水→去离子水浸泡24小时→三蒸水浸泡24小时→干燥备用。
5. 塑料制品的清洗
塑料制品质地软且耐腐蚀能力强，但不耐热，易出现划痕。其清洗程序为：器皿用后立即用流水冲洗→浸于自来水中过夜→用纱布、棉签和50℃稀洗液刷洗→流水冲洗(人工冲洗15—20遍)→晾干→浸于清洁液中15分钟→流水冲洗→蒸馏水浸泡两次(每次24小时)→晾干备用。
6. 清洗液的配制 清洁液
新配制的清洁液为棕红色，遇有机溶剂或水分增多时变成绿色，表明失效。
先在搪瓷盆中加入蒸馏水，加热溶解重铬酸钾，再将盆置流 动自来水中，待重铬酸钾液冷却后，缓慢加入浓硫酸，边加边用玻棒搅动，以混合液温度不过快上升和不出现重铬酸钾结晶为度。 玻璃滤器洗液
取10克硝酸钠和28．6毫升浓硫酸，放入盛有470毫升蒸馏水的玻璃缸内混匀备用。
清洁液配方
(2) 消毒灭菌 1. 湿热消毒 ◇ 湿热消毒的要求
使用压力蒸汽灭菌器进行湿热消毒。
① 消毒物品不能装得太满，物品之间应留有空隙，以利于消毒器内蒸汽的流动。 ② 排气管要插入消毒器的槽内。若排气管断裂，要将排气管与排气阀调至同一位置。 ③ 玻璃器材使用端(管口、瓶口)要向下放置。 ④ 液体消毒时，用棉塞或插有针头的胶塞封瓶口。
⑤ 加热前将放气阀摘子置垂直位(开放)，消毒器内空气随温度升高由此阀孔逸出，容器内冷空气
随之排出。当水煮沸时，有一股较急的蒸汽冲出时，将放气阀摘子置水平位(关闭)。排除冷空 气的另一种方法是：放气阀摘子置水平位(关闭)，加热，压力升至5磅时，将摘子置垂直位(开
放)，冷、热空气先后排出(可用手试)。待压力指针回归零位时，放气阀摘子再置水平位(关 闭)。
⑥ 继续加热，当消毒器内升压至需要压力时，计时并使压力恒定。压力维持方法：用电加热时， 可通过电源和灭菌器间的稳压器调节；没有稳压器时，用放气阀摘子自动排气调节；用煤气加 热时，可调节火力维持压力。根据消毒物品种类不同所选择的消毒压力和时间也不同，一般物 品(如布类、金属器械、玻璃器皿等)消毒的要求是15磅20分钟；橡胶制品为10磅10分钟；常规
液体消毒15磅15分钟。一般认为在这种压力下1分钟内几乎可杀死所有微生物，但由于消毒物品
的包装内仍可能留有冷空气，而使高压蒸汽不能达到消毒器的各部分，所以要延长消毒时间。 ⑦ 消毒完毕，待压力指针降至零位，再等数分钟，待放气阀摘子放完气后打开消毒器盖。液体瓶 口棉塞换胶皮塞或拔去胶皮塞针头换新塞。
◇ 湿热消毒的注意事项 ① 不可用安全阀摘子排气。
② 消毒的过程中若出现漏气现象，可调节消毒器盖内的胶垫的位置。
③ 灭菌完毕，不要急于取出消毒品，可利用消毒器的余热去除物品部分湿气，待半小时左右再移
入干燥箱烘干。
2. 干热消毒
这种消毒方法主要用于玻璃器皿消毒，一般温度在160℃维持90—120分钟就可以杀死芽胞，达到消灭包括细菌、芽孢在内的一切微生物的目的，还可破坏热原质。消毒完毕，待烘箱内温度冷却后再开门，避免因冷空气突然进入，烘箱内温度骤降引起玻璃器皿损坏。
3. 紫外线消毒
紫外线直接照射消毒是各实验室常用的方法，主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒。进行室内消毒时，紫外线灯应距地面2．5米，使各处有0．06微瓦能量的照射。当室内有尘土时，杀菌能力减弱，故其消毒环境应清洁无尘，并要求消毒空气湿度小于50％，才能达到杀菌效果。紫外线消毒时产生臭氧，对身体有害，故紫外线消毒停止后30分钟才可入室工作。目前有的实验室采用电子灭菌灯代替紫外灯进行空气消毒。
4. 滤过消毒
大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌。常用的除菌滤器有正压式和负压式两种。 ◇ 正压式(加压式)滤过消毒。
正压式除菌滤器为金属结构，中间垫一种特制的混合纤维素酯微孔滤膜，其过滤速度较快，效果较好，被多数实验室采用。滤膜孔径有0．6微米、0．45微米、0．22微米三种规格。滤过除菌时，常使用0．22微米孔径的滤膜。滤器上下层各有一槽，放置硅胶垫圈，将滤膜压紧固定。
hanks液 第五篇_冻存液、PBS、 D-hanks液、0.25%胰酶的配置
1. 冻存液的配置：小牛血清与DMSO按照9：1的比例(总1ml)混合即可 2. PBS（PH=7.2）配置
溶解定容：将药品（NaCl 8.0g，KCl 0.2g，Na2HPO4·12H2O 1.56g，KH2PO4 0.2g 瓶中准确定容至1000ml，摇匀即成新配制的PBS溶液。10%NaOH调PH到7.2。 移入溶液瓶内待消毒：将PBS倒入溶液瓶（吊针瓶）内,包好，放入高压锅内消毒30分钟。
3. D-hanks液
NaCl : 8.00g，
KCl : 0.40g，
Na2HPO4·12H2O : 0.12g或者Na2HPO4·7H2O：0.09g，
KH2PO4 : 0.06g，
无水葡萄糖：1.00g
双蒸水：1000ml
注：依次单一加入以上成分，呆每一成分溶解后再加另一成分
分装于4℃下保存。
4. 0.25%消化液（胰蛋白酶）配制方法：
D-hanks液：1000ml
胰蛋白酶粉：2.5g
方法：加入D-hanks液溶解胰蛋白酶粉（可水浴加热溶解或者磁力搅拌器加热溶解），NaHCO3 调PH（观察颜色），加滤器过滤除菌，4℃保存，用前可在37℃下回温。
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hanks液 第六篇_Hank's液和D-Hank's液
Hank's液和D-Hank's液
Hank's液是一种平衡盐溶液，主要用于细胞培养取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂等。 Hanks 液的配制
Hanks 液是生物医学实验中最常用的无机盐溶液和平衡盐溶液（Balanced Salt Solutio, ），简称H。主要用于配制配制培养液，稀释剂和细胞清洗液，而不能单独作为细胞，组织培养液。
D-Hank’s的配制
D-Hank's与Hank's的一个主要区别在于前者不含有钙和镁离子，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。
1．依次加入上述试剂至800mL蒸馏水中，溶解后调PH至7.2。 2．定容至1000mL。
3．高压灭菌，10磅10min。
hanks液 第七篇_hanks液,PBS等
Hanks液、TBS与PBS
Hanks液的配制方法
甲液：Na2HPO4•2H2O 0．06克 KH2PO4 0．06克 MgSO4•7H2O 0．20克葡萄糖 1．00克 NaCl 8．00克三蒸水 750毫升
乙液：CaCl2 0．14克三蒸水 100毫升
①将乙液徐徐加入甲液中。②将0．35克NaHCO3溶解在37℃ 100毫升三蒸水中。③用数滴NaHCO3液溶解0．02克酚红。④将②、③液移入①液中。⑤用三蒸水定容至1000毫升，充分混匀，4℃冰箱过夜。⑥滤过消毒，小瓶分装，冷藏。
注意：酚红对细胞有一定毒性，目前实验中的用量除0．02克外，还有0．01克和0．005克，也有BSS液中不加酚红的。酚红量不同，BSS颜色也不同。【hanks液,】
Hanks液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。D-Hanks液则是无钙镁离子的Hanks液。BSS与细胞生长状态下的pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简单，是组织培养基本用液，常用于配制培养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在BSS中可生存几个小时。胰蛋白酶(胰酸)溶液是一种常用的细胞消化液，原代培养时用于处理组织块，使细胞分离下来。传代时用胰蛋白酶使培养细胞离开所贴附的培养瓶表面，并分散成单个细胞。胰蛋白酶主要采自牛或猪的胰脏，呈白色粉末状，易潮解，应在低温干燥处保存。胰酶的活力常用一份胰酶解离酪蛋白的份数表示，常用胰酶活力为1：125或1：250。本实验室一般用1：250(GRC公司生产)。胰蛋白酶对细胞的分离效果与细胞的类型、特性和瓶壁表面特性有关。一般来说浓度大、温度高(勿高于37℃)、作用时间长，则对细胞分离能力大。但超过一定程度会损伤细胞，导致细胞传代后不能贴壁或死亡。胰酶在pH 8.0、37℃时消化能力最强。溶液中的Ca2+、Mg2+和血清会降低胰酶活力，所以配制胰酶时须用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks液。当消化结束时，可加入少量血清或含血清的培养基以终止胰酶作用。细胞传代使用的胰酶浓度是0．25％或0．2％。用于原代细胞培养消化组织块则为0．1％或0．125％。
PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是
1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、
2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及
3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），
其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。
如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered
solution）。
无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/L PH 7.2）
NaCl 8.0g
KCl 0.2g【hanks液,】
Na2HPO4 1.15g
（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。
Tris
分子式: (HOCH2)3CNH2
分子量.: 121.14
(1) 规格:
外观：白色结晶
含量：≥99.5 %
熔点：168-172℃
水不溶物：≤0.01%
强热残份：≤0.05%
重金属(as pb)：≤5PPM
干燥失重：≤0.2%
吸光度(260nm)：≤0.2
PH(0.1mol/L, 25℃)：10.0-10.8
Fe：≤1PPM
SO42+：≤5PPM
别名: 三羟甲基氨基甲烷; 2-氨基-2-羟基-1,3-丙二醇; 氨丁三醇; 缓血酸铵; 三甲醇氨基甲烷; Trishydroxymethylaminomethane; 2-amino-2-hydroxymethylpropanediol; THAM; TRIS; tris base; Tris buffer; free base; Tris(hydroxymethyl)methylamine; Trizma; trizma base; Trometamol; Tromethamine; Tromethane
Usage: 用作缓冲剂。Tromethamine is used as an intermediate for the preparation of surface active agents, vulcanization accelerators, and pharmaceuticals, and used as a titrimetric standard.
TBS是Tris-HCl缓冲盐溶液，为等渗盐溶液加Tris-HCl缓冲液
Tris缓冲盐水（TBS）：10mmol/L，Tris含0.9%NaCl，用1N HC1调pH至7.4 TRISbuffer：三羟甲基氨基甲烷缓冲液
TRISdiluent：三羟甲基氨基甲烷稀释液
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